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液相色譜柱的選擇從哪些方法和條件入手
點擊次數:227 發布時間:2020-02-21
  HYPERCARB液相色譜柱內保存溶劑和儀器係統內存留溶劑,如果和流動相不匹配,使用前需進行轉換。特別是流動村j含緩衝鹽時,如保存溶劑足純有機相或有機相比例高,直接將新柱接人使用,會導致緩衝鹽在柱內結晶析出,造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經常使用,用10%的有機溶劑保持即可。
 
  日常分析工作中,成版人性视频app香蕉视频使用的流動栩和待測樣品應用0.45pm濾膜過濾後再連接或注入到色譜儀上。對於有機相比例高的流動栩可以一起過濾出來備用,但是有機相比例小的流動相一定要現用現濾,分析結束時一定要先用10%的有機溶劑衝洗管路及色譜柱,為有機相少的流動相容易滋生細菌,造成色譜柱堵寒,影響色譜柱性能。
 
  短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩衝鹽)保存為佳,以盡量減少下次使用的平衡時間。一般隻建議在長期保存反相柱的時候用純醇或乙腈,使用80%左右有機相保存也屬好的選擇,且足以避免長菌。強烈建議在柱身上貼標簽標明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,可加0.05%溶液防止K菌。正相柱無論是短期還足長期,都推薦保存住所用流動相巾。
 
  HYPERCARB液相色譜柱選擇的方法和條件
 
  ①填料基質
 
  a.矽膠基質:純度高本錢低,強度大,化學修飾輕易,但pH值範圍有限。大多矽膠基質填料在pH2-8之間穩定,但經過特殊修飾的矽膠鍵合相可以穩定在pH1.5-10。
 
  b.聚合物基質:應用pH值範圍寬,溫度穩定(高溫可以達到80度以上),機械強度小。
 
  ②顆粒外形
 
  大多現代HPLC填料都是球形顆粒,但有時是不規則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規則顆粒有較大比表麵積和相對低廉的價格。
 
  ③顆粒粒徑
 
  粒徑越小柱效越高、分離度越高,但同時會導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些複雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半製備或製備柱。
 
  ④含碳量
 
  含碳量指的是矽膠表麵鍵合相的比例,與比表麵積和鍵合覆蓋度等有關。高含碳量進步柱容量、分辨率及分析時間,用於要求高分離度的複雜樣品;低含碳量分析時間短、展現不同的選擇性,用於快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
 
  ⑤孔徑和比表麵積
 
  HPLC吸附介質是多孔的顆粒,盡大多數的反應表麵於孔內。因此,分子必須進進孔內才能被吸附和分離。
 
  孔徑和比表麵積是相輔相成的兩個概念。孔徑小比表麵積大,反之亦然。比表麵積大,增加樣品與鍵合相之間的反應,增加保存,上樣量和複雜成分的分離度;比表麵積小,平衡時間快,適合梯度分析。
 
  ⑥孔容和機械強度
 
  孔容,又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應填料的機械強度。孔體積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱。孔體積為1.5mL/g或更小的填料大多用於HPLC分離,而孔體積大於1.5mL/g的填料使用於尺寸排阻色譜和低壓色譜。
 
  ⑦封端封端
 
  封端能夠降低極性堿性化合物由於與裸露的矽醇基相互作用而產生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產生不同的選擇性,尤其是極性樣品。
 
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